2018年8月10日，美國FDA宣布批準(zhǔn)Onpattro（Patisiran），是批準(zhǔn)的首款siRNA藥物及首個(gè)非病毒給藥系統(tǒng)的基因治療藥物。RNAi療法的上市，是諾貝爾獎(jiǎng)成果從概念走向?qū)嶋H治療用途的一個(gè)光輝里程碑。本文主要就Onpattro的臨床前安全性評(píng)價(jià)展開概述，為國內(nèi)外正在研究的siRNA藥物臨床前安評(píng)提供參考。
siRNA簡介
RNA藥物旨在通過基因的表達(dá)、沉默等功能治療疾病，基因治療被業(yè)界認(rèn)為是繼化學(xué)小分子藥物、生物大分子藥物之后的第三代治療藥物。目前，RNA藥物主要可分為四大類，即miRNA, siRNA，ASO，核酸適配體。由于siRNA藥物療效較好、技術(shù)取得突破，目前最受關(guān)注，siRNA目前是RNA藥物中最主要的一類。
小干擾RNA（Small interfering RNA；siRNA），是一類雙鏈RNA分子，長度為20-25個(gè)堿基對(duì)。它的作用機(jī)制是：長鏈雙RNA（double-stranded RNA，dsRNA）被剪切為siRNA后，與蛋白質(zhì)結(jié)合形成siRNA誘導(dǎo)干擾復(fù)合體(siRNA induced interference complex, RISC)，RISC再與靶基因的mRNA,結(jié)合，使mRNA降解,并最終靜默特定基因表達(dá)。
Onpattro (Patisiran)基本信息
Onpattro適應(yīng)癥為遺傳性轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白淀粉樣變性（hATTR）引起的周圍多發(fā)性神經(jīng)疾病，機(jī)制為沉默hATTR mRNA的表達(dá)，減少產(chǎn)生hTTR蛋白，逐漸減少周圍神經(jīng)中淀粉樣沉積物（hTTR）的積累，最終達(dá)到治療疾病的目的。臨床給藥途徑為靜脈輸注，每3周1次。siRNA分子的分子量約為14kD，具有生物大分子結(jié)構(gòu)特性。
載體導(dǎo)入技術(shù)是siRNA藥物的制劑難點(diǎn)。Onpattro是一種脂質(zhì)復(fù)合物注射液，將siRNA包裹在脂質(zhì)納米顆粒（LNP）中，靜脈輸注后藥物直接遞送至肝臟細(xì)胞內(nèi)。Onpattro曾獲得美國FDA授予的突破性療法認(rèn)定、優(yōu)先審評(píng)資格、快速通道資格和孤兒藥資格。
Onpattro 臨床前安評(píng)
PK試驗(yàn)。體內(nèi)分別做了ADME試驗(yàn)：大鼠和食蟹猴單次PK試驗(yàn)，放射性標(biāo)記的大鼠和食蟹猴組織分布，大鼠代謝產(chǎn)物鑒定、大鼠排泄物質(zhì)平衡。體外試驗(yàn)有：血漿蛋白結(jié)合，體外代謝產(chǎn)物鑒定、CYP誘導(dǎo)、CYP抑制、轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制實(shí)驗(yàn)。
一般毒理。種屬的選擇是大鼠和猴。給藥途徑與臨床一致，都是靜脈輸注。給藥頻率，臨床上是每3周給藥一次。分別開展了大鼠和猴6周每2周給藥1次（總計(jì)4次）并伴隨60天恢復(fù)期的毒理和毒代試驗(yàn)。由于Onpattro是一種脂質(zhì)納米微粒(LNP)復(fù)合物注射液，在大鼠和猴毒理試驗(yàn)中分別設(shè)置1組AF-011-1955（含有抗熒光素酶的siRNA，整合在了LNP）考查期毒性。在大鼠試驗(yàn)中，在所有給藥組發(fā)現(xiàn)肝臟組織病理學(xué)變化，沒有找到NOAEL（懷疑是LNP介導(dǎo)的毒性），所以開展了大鼠Patisiran 4周毒理試驗(yàn)，每4周給藥一次，總計(jì)2次。在該試驗(yàn)中所有給藥組又發(fā)現(xiàn)肝臟組織病理學(xué)變化，用LD（半數(shù)致死量）作為NOAEL。在大鼠試驗(yàn)中，通過增加GLP試驗(yàn)繼續(xù)探索NOAEL，為毒理試驗(yàn)中未找到NOAEL提供了借鑒。
遺傳毒理。開展了3個(gè)經(jīng)典的遺傳毒理試驗(yàn): Ames、染色體致畸變?cè)囼?yàn)、小鼠體內(nèi)微核試驗(yàn)。對(duì)于LNP中兩個(gè)新的賦形劑，也分別開展了Ames和染色體致畸變?cè)囼?yàn)。
安全藥理。心血管、呼吸、中樞神經(jīng)系統(tǒng)整合在一個(gè)試驗(yàn)中考查，種屬選的猴。此外還有體外hERG試驗(yàn)，不過考查的是LNP對(duì)hERG作用。
此外還開展了一些特殊毒理試驗(yàn)，還包括體外溶血試驗(yàn)、HPMC細(xì)胞因子試驗(yàn)、小鼠免疫刺激試驗(yàn)。
Onpattro分子的分子量約為14kD，具有生物大分子結(jié)構(gòu)特性。藥代部分，體內(nèi)ADME做的很全，體外試驗(yàn)，將重要的都做了，足夠支持臨床I期?？傮w上，Onpattro臨床前毒理試驗(yàn)做的非常全面。一般大分子不做遺傳毒理，原因是主要作用于細(xì)胞表面或間質(zhì)，而不會(huì)與染色體或DNA作用。然而Onpattro靜脈輸注后藥物直接遞送至肝臟細(xì)胞內(nèi)，所以也考查了遺傳毒理。
展望
說到近些年的熱點(diǎn)，siRNA療法無疑是其中之一。第1個(gè)siRNA藥物獲批，對(duì)整個(gè)領(lǐng)域有巨大的振奮作用。資本回歸RNAi領(lǐng)域，掀起第二次投資熱潮；加上政府、政策鼓勵(lì)，RNAi藥物迎來發(fā)展機(jī)遇。siRNA藥物療效好，技術(shù)取得突破，成為當(dāng)前RNAi類藥物最受關(guān)注的一類技術(shù)，也將當(dāng)仁不讓的成為主流的RNAi藥物。通過對(duì)首款siRNA藥物Onpattro的臨床前安評(píng)概述，為siRNA藥物臨床前方案設(shè)計(jì)提供一些參考和借鑒。